一種純生啤酒膜清洗再生酶制劑及清洗方法

技術(shù)領(lǐng)域

[0001] 本發(fā)明屬于發(fā)酵工程領(lǐng)域，涉及啤酒發(fā)酵生產(chǎn)行業(yè)，具體是一種純生啤酒膜清洗再生酶制劑及清洗方法。

背景技術(shù)

[0002] 純生啤酒的生產(chǎn)中采用低溫微孔濾膜過(guò)濾除菌工藝取代傳統的巴氏熱殺菌過(guò)程，使啤酒的口味更新鮮、純正、富有營(yíng)養，深受消費者的青睞。純生啤酒生產(chǎn)技術(shù)的關(guān)鍵為無(wú)菌釀造、無(wú)菌過(guò)濾與無(wú)菌灌裝，而微孔濾膜過(guò)濾技術(shù)是純生啤酒生產(chǎn)的核心。純生啤酒的膜過(guò)濾系統，目前國內外啤酒廠(chǎng)一般采用粗、終兩套過(guò)濾系統對清酒進(jìn)行過(guò)濾，利用其精細的物理過(guò)濾特性(粗濾0.65 μ m,終濾0.45 μ m),將酒液中的啤酒酵母、有害微生物和一部分蛋白多酚等阻隔和過(guò)濾，保證純生啤酒的生物與非生物穩定性，從而保證啤酒的營(yíng)養、質(zhì)量和風(fēng)味穩定性。由于啤酒發(fā)酵液中存在一些膜堵物質(zhì)，堵塞膜孔后形成的膜污染可大大降低膜的濾過(guò)速度和酒液濾過(guò)量。為了減少膜堵塞問(wèn)題，純生啤酒發(fā)酵普遍采取選用高成本的澳麥、加麥等優(yōu)質(zhì)麥芽進(jìn)行釀造，并針對純生啤酒原料的特點(diǎn)對糖化工藝進(jìn)行控制，減少半纖維素等的含量以減低對膜堵塞的影響；在清酒過(guò)濾時(shí)還通過(guò)使用硅藻土、硅膠與PVPP來(lái)輔助濾膜的過(guò)濾，在膜過(guò)濾生產(chǎn)后還必須要有清洗再生工藝，清洗除去膜孔中的堵塞物，使膜通量再生恢復。膜清洗再生工藝主要有①物理法清洗:如熱水法、海綿球洗凈法、反壓沖洗和循環(huán)洗滌等化學(xué)法:酸/堿清洗；③機械刮除方法等。目前在純生啤酒的生產(chǎn)中，膜過(guò)濾結束后的清洗再生工藝主要使用化學(xué)法，先用水漂洗，除去附著(zhù)在膜上的蛋白質(zhì)、酒花樹(shù)脂等雜質(zhì)，接著(zhù)按照順序用溫水、熱堿、熱水、冷水進(jìn)行清洗和再生。但微孔濾膜過(guò)濾一定量的酒液后其膜通量就迅速下降，采用以上化學(xué)法清洗再生工藝則再生效率很差，需更換膜以達到過(guò)濾要求。目前各啤酒廠(chǎng)配備的膜過(guò)濾系統以進(jìn)口 Sartorius、Pall和Seitz公司的產(chǎn)品較多，更換一套新過(guò)濾膜約20-40萬(wàn)元，導致純生啤酒的運行成本較高。

[0003] 膜的清洗再生，除了可以用酸、堿、表面活性劑等化學(xué)試劑洗去吸附在膜面和膜孔的污染物以外，對于大分子的污染物，還可以用相應的酶來(lái)水解成小分子，減低污染物的吸附和堵塞作用，進(jìn)而易于從膜面和膜孔中清洗除去。酶法清洗可使膜性能恢復程度高，且不會(huì )對膜造成任何損害，這已在一些新興膜濃縮、膜分離行業(yè)得到了應用。如中國專(zhuān)利CN100503818C發(fā)明了一種用于果蔬汁超濾濃縮工藝的超濾膜清洗酶及提高超濾膜通量的生產(chǎn)方法，針對果蔬汁膜過(guò)濾中的主要污染物成分果膠、纖維素、半纖維素、蛋白質(zhì)等，設計了果膠酶、纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶等組分，分解膜表面的滯留物質(zhì)，提高化學(xué)清洗劑清洗效果，改善膜通量，解決了果蔬汁濃縮生產(chǎn)上出現的超濾膜堵塞，膜污染，膜處理能力降低的問(wèn)題。中國專(zhuān)利CN 101457182B發(fā)明了一種含有蛋白酶的液體膜清洗劑，用于主要有機污染物為蛋白質(zhì)類(lèi)大分子的生物發(fā)酵液分離用陶瓷膜的清洗，不僅縮短了清洗時(shí)間，還能減緩膜通量衰減速度，降低清洗頻率。一些研究報道也表明，用胰蛋白酶溶液清洗被醬油、紅霉素、肌酐發(fā)酵液污染的陶瓷膜，可以比酸/堿清洗法縮短清洗時(shí)間，提高濾料通量。發(fā)明內容

[0004] 本發(fā)明的目的是針對純生啤酒膜過(guò)濾中主要的大分子膜堵物質(zhì)，提供可水解這些膜堵物質(zhì)的酶組分的組合，有效水解大分子為小片段，易于從膜面和膜孔中清洗除去；并提供一種酶法和化學(xué)法結合的，使純生啤酒濾膜在生產(chǎn)后膜通量能夠具有良好的再生恢復效果，提高膜的濾酒能力。

[0005]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下:

[0006] 1.一種用于純生啤酒膜清洗再生的酶制劑由清洗再生酶I和清洗再生酶II組成；

[0007] I)清洗再生酶I由戊聚糖酶、β -葡聚糖酶和甘露聚糖酶組成,其活力范圍是:若戊聚糖酶的酶活力以lOOOOU/g計，β -葡聚糖酶的酶活力以20000U/g計，甘露聚糖酶的酶活力以lOOOOU/g計時(shí)，戊聚糖酶、β-葡聚糖酶和甘露聚糖酶的質(zhì)量百分比如下:

[0008] 戊聚糖酶 40-80%

[0009] β-葡聚糖酶 10-50%

[0010] 甘露聚糖酶 2-20%

[0011] 2)清洗再生酶II由脯氨酸內切蛋白酶和中性蛋白酶組成，其活力范圍是:若脯氨酸內切蛋白酶的酶活力以5U/g計，中性蛋白酶的酶活力以100000U/g計時(shí)，脯氨酸內切蛋白酶和中性蛋白酶的質(zhì)量百分比如下:

[0012] 脯氨酸內切蛋白酶 40-80%

[0013] 中性蛋白酶 20-60%

[0014] 本發(fā)明的純生啤酒膜清洗再生酶各組分，均由微生物發(fā)酵產(chǎn)生，各組分的衛生要求均符合我國《食品安全國家標準食品工業(yè)用酶制劑》(GB 255942010)或聯(lián)合國糧農組織和世界衛生組織食品添加劑聯(lián)合專(zhuān)家委員會(huì )(JECFA)、美國食品化學(xué)法典(FCC)關(guān)于食品加工用酶制劑的衛生要求。戊聚糖酶的基因可來(lái)源于黑曲霉、李氏木霉、綠色木霉、棉狀嗜熱絲孢菌、畢赤酵母、孤獨腐質(zhì)霉、枯草芽孢桿菌、米曲霉等，β -葡聚糖酶的基因來(lái)源可以是地衣芽孢桿菌、孤獨腐質(zhì)霉、哈次木霉、黑曲霉、枯草芽孢桿菌、李氏木霉、解淀粉芽孢桿菌、綠色木霉、Disporotrichum dimorphosporum、Talaromyces emersonii 等，甘露聚糖酶的基因來(lái)源可以來(lái)源于枯草芽孢桿菌、黑曲霉、李氏木霉、鏈霉菌等，脯氨酸內切蛋白酶的基因來(lái)源可以來(lái)源于黑曲霉、點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌、黃單胞菌等，中性蛋白酶的基因來(lái)源可以來(lái)源于枯草芽孢桿菌等；但均不限于以上的菌株。

[0015] 2.純生啤酒膜過(guò)濾后進(jìn)行的酶法膜清洗再生方法，按以下步驟進(jìn)行:

[0016] I)常規水洗和堿法清洗

[0017] (I)在堿液罐中準備55°C熱水(約75%液位)，打入膜過(guò)濾系統保溫循環(huán)30分鐘。

[0018] (2)將膜過(guò)濾系統及管路中殘水排空，適當進(jìn)行備壓排放；再打入55°C熱水，充滿(mǎn)過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡約40小時(shí)。

[0019] (3)將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空，在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用約2噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統。

[0020] (4) CIP系統手動(dòng)控制進(jìn)行冷水沖洗堿罐5分鐘，排空浙干。

[0021] (5)配制堿性清洗劑，pH值10-12，進(jìn)入膜過(guò)濾系統堿再生處理程序。

[0022] (6)按系統程序進(jìn)行完整性測試。[0023] 2)清洗再生酶I清洗

[0024] (1)稱(chēng)取膜清洗再生酶1 0.5-2.0kg,用5L左右45°C溫水充分攪拌溶解。

[0025] (2)取潔凈紗布分別折疊成4、8、16層，將上述膜清洗再生酶I溶液逐級過(guò)濾至清。

[0026] (3)將步驟(2)過(guò)濾至清的膜清洗再生酶I溶液用潔凈桶盛裝，并置于4°C以下低溫保存至使用，時(shí)間不超過(guò)3天。

[0027] (4)排空CIP系統堿液罐中的堿性清洗液，用冷水沖洗至pH試紙檢測為中性。

[0028] (5)在堿液罐中準備55°C熱水，將保存的澄清膜再生酶I溶液加入熱水中，熱水量使酶液稀釋1000倍，保溫循環(huán)30分鐘。

[0029] (6)將膜過(guò)濾系統及管路中殘水排空，將步驟(5)稀釋的酶液打入膜過(guò)濾系統中，適當進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡12-40小時(shí)(無(wú)需再加熱)。

[0030] 3)清洗再生酶II清洗

[0031] (1)稱(chēng)取膜清洗再生酶II 0.5-2.0kg，加5L 37°C溫水充分攪拌溶解。

[0032] (2)排空CIP系統堿液罐中的清洗液，用冷水沖洗至pH試紙檢測為中性。

[0033] (3)在堿液罐中準備37°C熱水，將保存的澄清膜再生酶溶液加入中，熱水量使酶液稀釋2000倍，保溫循環(huán)30分鐘。

[0034] (4)將膜過(guò)濾系統及管路中殘水排空，將步驟(3)稀釋的酶液打入膜過(guò)濾系統中，適當進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡12-40小時(shí)(無(wú)需再加熱)；浸泡結束后，進(jìn)行無(wú)菌取樣檢測細菌含量。

[0035] 4)水洗

[0036] 步驟3)結束后將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空，在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用2-10噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統。

[0037] 5)堿性清洗劑循環(huán):

[0038] 配制堿性清洗劑，pH值10-12，進(jìn)入膜過(guò)濾系統堿再生處理程序，熱水及堿液加熱到55-60°C，在膜過(guò)濾系統操作面板上選擇所要再生的線(xiàn)進(jìn)行清洗。再生完成后，膜過(guò)濾系統自動(dòng)進(jìn)行完整性測試；通過(guò)操作面板上可察看完整性測試情況，ΛΡ < 70mbar。如果ΔΡ ^ 70mbar可用冷水反復沖洗數次，直至壓差盡可能降下來(lái)。

[0039] 6)完整性測試:

[0040] 完整性測試時(shí)間10分鐘，濾芯潤濕后在20°C ±5°C下進(jìn)行完整性測試。用壓縮空氣或氮氣給過(guò)濾器施加3bar的正向壓力，在這個(gè)過(guò)程中通過(guò)壓力使過(guò)濾器內的水從測試閥排出，打開(kāi)排污閥將全部的殘留水排凈；緩慢將過(guò)濾器壓力升至1.2bar的測試壓力，然后關(guān)閉氣體進(jìn)口閥門(mén)，等待5分鐘使其達到穩定狀態(tài)。

[0041] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:使用本發(fā)明的純生啤酒膜清洗再生酶和清洗方法，可顯著(zhù)提高膜的再生恢復能力，延長(cháng)膜的使用壽命，提高每套微濾膜的濾酒量35%以上，節約膜的使用成本。

具體實(shí)施方式

[0042] 為實(shí)現本發(fā)明，事先進(jìn)行試驗，將純生啤酒膜過(guò)濾生產(chǎn)后的濾膜解剖，收集膜堵物質(zhì)，分析其主要成分及其性質(zhì)，并用多種酶類(lèi)進(jìn)行水解反應，從中篩選對膜堵物質(zhì)具有良好水解作用的酶種及其使用濃度。試驗研究表明，純生啤酒膜過(guò)濾生產(chǎn)中的大分子膜堵物質(zhì)，主要包括蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-多酚化合物、戊聚糖、β -葡聚糖等。

[0043] 從純生啤酒膜堵物質(zhì)中分離出的醇溶性物質(zhì)，主要是蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-多酚化合物。這些蛋白質(zhì)是富含脯氨酸的大麥醇溶蛋白，由于脯氨酸的五元吡咯環(huán)結構的存在，蛋白質(zhì)肽鍵前的脯氨酸氨基氮上缺少一個(gè)氫原子，使環(huán)結構前的羰基氧成為強的氫原子受體，這樣來(lái)源于麥芽和酒花的多酚類(lèi)物質(zhì)不僅通過(guò)疏水作用與蛋白質(zhì)聚合，還通過(guò)氫鍵與醇溶性蛋白富含脯氨酸的區域進(jìn)一步穩定它們之間的聚合。這些穩定的聚合物在膜面形成濃差極化時(shí)容易析出、沉淀在膜面和膜孔中，形成了純生啤酒膜污染的重要來(lái)源。脯氨酸內切蛋白酶是專(zhuān)一性水解多肽中脯氨酸殘基的羧基端肽鍵位點(diǎn)，可將純生啤酒濾膜中的這些富含脯氨酸的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-多酚聚合物較充分地水解為短肽，減少蛋白質(zhì)和多酚形成的聚合，從而易于從膜面和膜孔中清洗除去；酶切位點(diǎn)特異性較低的中性蛋白酶也可以有較好的作用。而其它的蛋白酶，如木瓜蛋白酶水解蛋白質(zhì)的主要位點(diǎn)是下一個(gè)氨基酸為精氨酸殘基的位置，胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)的位點(diǎn)是由賴(lài)氨酸、精氨酸的羧基形成的肽鍵，糜蛋白酶主要識別肽鏈中的苯丙氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸殘基，彈性蛋白酶的識別位點(diǎn)為肽鏈中的纈氨酸、亮氨酸、絲氨 酸等脂肪族氨基酸殘基，胃蛋白酶則識別和切斷酪氨酸、苯丙氨酸等氨基端的肽鍵，皆不能很好地水解富含脯氨酸的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-多酚聚合物。

[0044] 從純生啤酒膜堵物質(zhì)中分離出的多糖類(lèi)物質(zhì)，主要是來(lái)源于麥芽但在糖化過(guò)程中未能充分降解的半纖維素類(lèi)如戊聚糖、β -葡聚糖等，以及來(lái)源于啤酒發(fā)酵后期酵母自溶時(shí)產(chǎn)生的甘露聚糖等。這些多聚糖物質(zhì)在純生啤酒膜過(guò)濾時(shí)，醪液運動(dòng)形成的剪切力能將醪液中無(wú)規則、無(wú)規律排列的多聚糖分子擴展、聯(lián)結在一起，通過(guò)氫鍵形成多聚糖膠體物質(zhì)，在膜過(guò)濾過(guò)程中通過(guò)濃差極化和膜污染沉積在膜表面和膜孔中。這些多聚糖可由相應的戊聚糖酶、β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶等水解成小分子的糖，易于從膜面和膜孔中清洗除去。

[0045] 下面結合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。

[0046] 本發(fā)明所采用的戊聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶、脯氨酸內切蛋白酶、中性蛋白酶等原料均可通過(guò)市售方式加以購買(mǎi)。

[0047] 實(shí)施例1

[0048] 某一純生啤酒生產(chǎn)中清洗再生酶的制備與膜清洗

[0049] 原料組成:清洗再生酶1、清洗再生酶II。

[0050] 清洗再生酶1:

[0051] 戊聚糖酶375g，β -葡聚糖酶100g，甘露聚糖酶25g。

[0052] 制備方法:將戊聚糖酶、β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶在無(wú)菌環(huán)境下按上述比例通過(guò)機械混均即可。

[0053] 清洗再生酶I1:

[0054] 脯氨酸內切蛋白酶250g，中性蛋白酶250g。

[0055] 制備方法:將脯氨酸內切蛋白酶、中性蛋白酶在無(wú)菌環(huán)境下按上述比例通過(guò)混均即可。

[0056] 膜清洗:

[0057] 一套微孔濾膜(0.45 μ m, 750mm, 36支)按生產(chǎn)要求過(guò)濾純生啤酒，然后按常規酸堿清洗方式進(jìn)行再生:在堿液罐中準備55°C熱水，打入膜過(guò)濾系統保溫循環(huán)30分鐘；將膜過(guò)濾系統及管路中殘水排空，進(jìn)行備壓排放，再打入55°C熱水，保證充滿(mǎn)過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡40小時(shí)；將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空,在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用2噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統；CIP系統手動(dòng)控制進(jìn)行冷水沖洗堿罐5分鐘，排空浙干；配制堿性清洗劑，進(jìn)入膜過(guò)濾系統堿再生處理程序。

[0058] 取膜清洗再生酶I 0.5kg，用5L溫度為45°C的溫水充分攪拌溶解，過(guò)濾至清亮；排空CIP系統堿液罐中的堿性清洗液，用5-8°C冷水沖洗至pH試紙檢測為6.8-7.2 ;將膜過(guò)濾系統及管路中的殘水排空，把上述酶液打入膜過(guò)濾系統中，用0.2kg壓力進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡30小時(shí)；

[0059] 取膜清洗再生酶II 0.5kg，加5L溫度為37°C的溫水充分攪拌溶解，過(guò)濾至清亮；排空CIP系統堿液罐中的清洗液，用5-8°C冷水沖洗至pH試紙檢測為6.8-7.2 ;將膜過(guò)濾系統及管路中的殘水排空，把上述酶液打入膜過(guò)濾系統中，用0.2kg壓力進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡30小時(shí)，浸泡結束后，進(jìn)行無(wú)菌取樣檢測細菌含量。

[0060] 取樣后將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空，在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用5噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統，經(jīng)堿性清洗劑循環(huán)后通過(guò)完整性測試。結果如表1所示。

[0061 ] 表1常規化學(xué)清洗再生效果[0062]

[0063] 一套微孔濾膜(0.45 μ m, 750mm, 36支)按生產(chǎn)要求過(guò)濾純生啤酒，然后按本發(fā)明所述清洗再生酶清洗方法進(jìn)行再生，結果如表2所示。

[0064] 表2酶法清洗再生效果

[0065]

[0066] 實(shí)施例2

[0067] 另一純生啤酒生產(chǎn)中清洗再生酶的制備與膜清洗

[0068] 原料組成:清洗再生酶1、清洗再生酶II。

[0069] 清洗再生酶1:

[0070] 戊聚糖酶375g，β -葡聚糖酶200g，甘露聚糖酶25g。

[0071] 制備方法:將戊聚糖酶、β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶在無(wú)菌環(huán)境下按上述比例通過(guò)機械混均即可。

[0072] 清洗再生酶I1:

[0073] 脯氨酸內切蛋白酶300g，中性蛋白酶200g。

[0074] 制備方法:將脯氨酸內切蛋白酶、中性蛋白酶在無(wú)菌環(huán)境下按上述比例通過(guò)混均即可。

[0075] 生產(chǎn)試驗:

[0076] 一套微孔濾膜(0.45 μ m, 750mm, 36支)按生產(chǎn)要求過(guò)濾純生啤酒，然后按常規酸堿清洗方式進(jìn)行再生:在堿液罐中準備55°C熱水，打入膜過(guò)濾系統保溫循環(huán)30分鐘；將膜過(guò)濾系統及管路中殘水排空，進(jìn)行備壓排放，再打入55°C熱水，保證充滿(mǎn)過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡40小時(shí)；將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空,在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用2噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統；CIP系統手動(dòng)控制進(jìn)行冷水沖洗堿罐5分鐘，排空浙干；配制堿性清洗劑，進(jìn)入膜過(guò)濾系統堿再生處理程序。

[0077] 取膜清洗再生酶I 0.6kg，用4.5L 45°C溫水充分攪拌溶解、過(guò)濾至清亮；排空CIP系統堿液罐中的堿性清洗液，用5-8°C冷水沖洗至pH試紙檢測為6.8-7.2 ;將膜過(guò)濾系統及管路中的殘水排空，把上述酶液打入膜過(guò)濾系統中，用0.2kg壓力進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡25小時(shí)；

[0078] 取膜清洗再生酶II 0.5kg，加4.5L37°C溫水充分攪拌溶解、過(guò)濾至清亮；排空CIP系統堿液罐中的清洗液，用5-8°C冷水沖洗至pH試紙檢測為6.8-7.2 ;將膜過(guò)濾系統及管路中的殘水排空，把上述酶液打入膜過(guò)濾系統中，用0.2kg壓力進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡25小時(shí)，浸泡結束后，進(jìn)行無(wú)菌取樣檢測細菌含量。[0079] 取樣后將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空，在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用5噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統，經(jīng)堿性清洗劑循環(huán)后通過(guò)完整性測試。結果如表3所示。

[0080] 表3常規化學(xué)清洗再生效果

[0081]

[0082] 一套微孔濾膜(0.45 μ m，750mm，36支)按生產(chǎn)要求過(guò)濾純生啤酒，然后按本發(fā)明所述清洗再生酶清洗方法進(jìn)行再生，結果如表4所示。

[0083] 表4酶法清洗再生效果

[0084]

[0085] 實(shí)施例3[0086] 另一純生啤酒生產(chǎn)中清洗再生酶的制備與膜清洗

[0087] 原料組成:清洗再生酶1、清洗再生酶II。

[0088] 清洗再生酶1:

[0089] 戊聚糖酶315g，β -葡聚糖酶315g，甘露聚糖酶70g。

[0090] 制備方法:將戊聚糖酶、β -葡聚糖酶、甘露聚糖酶在無(wú)菌環(huán)境下按上述比例通過(guò)機械混均即可。

[0091] 清洗再生酶I1:

[0092] 脯氨酸內切蛋白酶375g，中性蛋白酶125g。

[0093] 制備方法:將脯氨酸內切蛋白酶、中性蛋白酶在無(wú)菌環(huán)境下按上述比例通過(guò)混均即可。

[0094] 生產(chǎn)試驗:

[0095] 一套微孔濾膜(0.45 μ m, 750mm, 36支)按生產(chǎn)要求過(guò)濾純生啤酒，然后按常規酸堿清洗方式進(jìn)行再生:在堿液罐中準備55°C熱水，打入膜過(guò)濾系統保溫循環(huán)30分鐘；將膜過(guò)濾系統及管路中殘水排空，進(jìn)行備壓排放，再打入55°C熱水，保證充滿(mǎn)過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡40小時(shí)；將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空,在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用2噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統；CIP系統手動(dòng)控制進(jìn)行冷水沖洗堿罐5分鐘，排空浙干；配制堿性清洗劑，進(jìn)入膜過(guò)濾系統堿再生處理程序。

[0096] 取膜清洗再生酶I 0·.7kg，用4.5L 45°C溫水充分攪拌溶解，過(guò)濾至清亮；排空CIP系統堿液罐中的堿性清洗液，用5-8°C冷水沖洗至pH試紙檢測為6.8-7.2 ;將膜過(guò)濾系統及管路中的殘水排空，把上述酶液打入膜過(guò)濾系統中，用0.2kg壓力進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡20小時(shí)；

[0097] 取膜清洗再生酶II 0.5kg，加4.5L37°C溫水充分攪拌溶解、過(guò)濾至清亮；排空CIP系統堿液罐中的清洗液，用5-8°C冷水沖洗至pH試紙檢測為6.8-7.2 ;將膜過(guò)濾系統及管路中的殘水排空，把上述酶液打入膜過(guò)濾系統中，用0.2kg壓力進(jìn)行備壓排放，保證充滿(mǎn)過(guò)膜過(guò)濾機，進(jìn)行浸泡20小時(shí)，浸泡結束后，進(jìn)行無(wú)菌取樣檢測細菌含量。

[0098] 取樣后將膜過(guò)濾系統的浸泡液排空，在膜過(guò)濾系統操作平臺設定用5噸冷水沖洗膜過(guò)濾系統，經(jīng)堿性清洗劑循環(huán)后通過(guò)完整性測試。結果如表5所示。

[0099] 表5常規化學(xué)清洗再生效果

[0100]

[0101] 一套微孔濾膜(0.45 μ m, 750mm, 36支)按生產(chǎn)要求過(guò)濾純生啤酒，然后按本發(fā)明所述清洗再生酶清洗方法進(jìn)行再生，結果如表6所示。

[0102] 表6酶法清洗再生效果

[0103]

[0104] 以上所述的實(shí)施例，是本發(fā)明在純生啤酒生產(chǎn)中較好的具體應用，但本發(fā)明的具體技術(shù)內容和應用并不受實(shí)施例的局限。